Principal diferença
A principal diferença entre Southern Blot e Western Blot é que Southern Blot é uma técnica usada para detectar um fragmento de DNA específico em uma determinada amostra, enquanto Western Blot é usado para encontrar uma proteína específica em uma determinada amostra.
Transferência do Sul vs. Transferência do Oeste
Blotting é um tipo de técnica usada por cientistas para separar diferentes moléculas de uma mistura ou amostra. Nesta técnica, macromoléculas como ácidos nucleicos (DNA e RNA) e proteínas em uma mistura são movidas através de uma placa de gel. Aqui, as partículas minúsculas se moverão mais rápido que as maiores. Essas moléculas são pressionadas contra a superfície de uma membrana imobilizada que transfere as moléculas para a membrana. Existem diferentes tipos de manchas com base na detecção de material específico, ou seja, Southern blot, Northern blot e Western blot. Southern blot é o tipo de mancha usado para detectar DNA enquanto Western blot usado para descobrir proteínas. A transferência do sul foi desenvolvida por Edward M. Sul em 1975. Por isso, é conhecido como a transferência do sul. Por outro lado, Western Blot foi desenvolvido pelo grupo de George Stark na Universidade de Stanford em 1979. Este nome foi usado para coincidir com Southern Blot. Southern blotting é usado para encontrar uma sequência de DNA específica, enquanto Western blotting é usado para encontrar uma proteína específica ou sequência de aminoácidos.
Quadro comparativo
O que é Southern Blotting?
A transferência do sul é o método mais antigo de transferência que foi dado por Edwin Southern, assim chamado de transferência do sul. É usado para descobrir uma sequência específica de DNA em uma determinada amostra ou mistura. As etapas envolvidas durante o Southern blotting são eletroforese, blotting e detecção de sequências específicas. Em primeiro lugar, o DNA é fragmentado com a ajuda de uma enzima de restrição específica. Os fragmentos de DNA desejados são então separados por eletroforese em gel. Esses fragmentos são desnaturados com a ajuda de uma solução alcalina, por exemplo, NaOH, etc. para separar as duas fitas de DNA. Esses fragmentos de DNA de fita simples são então transferidos para uma membrana através do processo de transferência. Este DNA ligado à membrana é então tratado com uma sonda marcada. Esta sonda irá aderir à sua fita complementar na membrana de DNA que pode ser visualizada por autorradiograma etc.
O que é Western Blot?
O método Western blot foi inventado pelo grupo de George Stark na Universidade de Stanford e é usado para identificar uma sequência específica de aminoácidos na proteína. Também é conhecido como protein blot ou immunoblot. As etapas durante o Western blotting são eletroforese, blotting e detecção de proteínas específicas. Primeiro, homogeneize a mistura. Em seguida, separe a molécula de interesse com a ajuda da eletroforese. Transfira essas moléculas para a membrana e identifique a proteína específica usando uma sonda específica.
Principais diferenças
- Uma técnica usada para encontrar uma sequência de DNA específica em uma determinada mistura é conhecida como Southern blotting, enquanto uma técnica usada para encontrar uma sequência de aminoácidos específica de proteína em uma determinada mistura é conhecida como Southern blotting.
- O Southern Blot foi desenvolvido por Edward M. Southern em 1975, conhecido como Southern Blot. Por outro lado, o western blot foi desenvolvido pelo grupo de George Stark na Universidade de Stanford em 1979.
- Southern blotting é usado para descobrir uma sequência de DNA específica. Em contraste, o Western blotting é usado para descobrir uma proteína específica ou sequência de aminoácidos.
- A transferência do sul, por outro lado, funciona com o princípio da hibridização; Western blot funciona no princípio do método de imunodetecção ou interação antígeno-anticorpo.
- Um DNA de fita simples ou, às vezes, RNA é usado como sonda no Southern blot, por outro lado, no Western blot, anticorpos primários e secundários são usados como sonda.
- A eletroforese em gel de agarose é usada no Southern blot, enquanto o gel SDS PAGE/poliacrilamida é usado para separar proteínas no Western blot.
- Por outro lado, o Southern blotting segue o procedimento de blotting capilar; Western Blotting segue o procedimento de transferência elétrica.
- Durante o Southern blot, a amostra deve ser desnaturada, enquanto durante o Western blot, a amostra deve estar em seu estado original.
- Por outro lado, nenhuma etapa como o bloqueio está envolvida no Southern Blot; Durante o Western Blot, os sítios de anticorpos não específicos são bloqueados no papel de nitrocelulose com a ajuda de leite em pó ou albumina de soro bovino (BSA).
- Os métodos de marcação comuns usados no Southern blotting são o uso de corantes cromogênicos ou marcação radioativa ou marcação fluorescente, etc., enquanto os métodos de marcação usados no Western blotting são o uso de anticorpos marcados com fluorescência ou marcação. etc.
- Detecção de luz, autorradiografia e mudanças de cor são usados como métodos de detecção em Southern blot, enquanto métodos de detecção em Western blot são mudanças de cor e detecção de luz, etc.
- Southern blot é usado na detecção de DNA, teste de paternidade, impressão digital de DNA, para identificação de vítimas, para identificar criminosos, encontrar agentes infecciosos e identificar mutações ou rearranjos genéticos, etc. Em contraste, o Western Blot é usado para encontrar a quantidade de proteína em uma mistura, para detectar a presença de HIV, vírus e bactérias, etc. no soro, para encontrar proteínas defeituosas e usado como medida definitiva para herpes, hepatite B, doença de Lyme e doença de Creutzfeldt-Jacob, etc.
Conclusão
A discussão acima resume que o Southern blotting é a técnica mais antiga de blotting usada para encontrar um segmento de DNA específico em uma amostra, enquanto o Western blotting foi descoberto mais tarde e usado para identificar uma sequência de aminoácidos específica ou proteína específica.